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    亮發(fā)光桿菌馴化育種:孢子分離法

    點(diǎn)擊次數(shù):1126  更新時(shí)間:2018-07-26

        亮發(fā)光桿菌該法是采用采用成熟的擔(dān)孢子萌發(fā)培養(yǎng)成菌絲體而得到純菌種的方法。擔(dān)孢子具備親本的遺傳特性,但變異的機(jī)會多,生命力強(qiáng),可能選育出優(yōu)良的菌株。“種茹”的選擇要求與組織分離法一樣,但成熟度要求八九分成熟的金針茹子實(shí)體,因?yàn)檫@時(shí)的孢子萌發(fā)力強(qiáng),數(shù)量多,分離之后可供挑選的機(jī)會多。孢子分離法有單孢分離與多孢分離兩種方法,馴化育種采用的是多孢子分離法,該法又分為“種茹”孢子彈射法和菌褶貼管壁法兩種。 
        (1)“種茹”孢子彈射法:取“種茹”切去菌柄,表面用70%的酒精擦洗干凈或浸入0.1%的升水中1~2min,無菌水沖洗數(shù)遍后,用濾紙吸干表面水分。在接種箱或無菌室內(nèi)按無菌操作規(guī)程將“種茹”的菌褶朝下,用鐵絲支撐置于培養(yǎng)皿上,放在消毒擦洗過和大型鐘罩下,把滅菌過的濾紙置于培養(yǎng)皿容器內(nèi)。整個(gè)裝置要讓之通氣,否則罩內(nèi)濕度過大,孢子反而不易落下。經(jīng)過12~20h,就可以看到在培養(yǎng)皿內(nèi)或?yàn)V紙上散落一層白色的孢子印。用無菌接種環(huán)沾取少量的孢子,置于盛有無菌生理鹽水的大試管或三角燒瓶中稀釋,制成孢子懸浮液,再用無菌的注射針筒或滴管,吸取孢子懸浮液,注入1~2滴孢子液于培養(yǎng)基表面,并用無菌接種環(huán)涂布培養(yǎng),待孢子萌發(fā)后挑取孢子萌發(fā)早、長勢好的菌落進(jìn)行轉(zhuǎn)管培養(yǎng)。 
        (2)菌褶貼管壁法:鉤取一塊干凈、發(fā)育良好的金針茹菌褶,在無菌操作條件下,貼在斜面培養(yǎng)基上方的試管內(nèi)壁上,為了讓之貼牢,可加1~2滴無菌水在試管壁上。放好菌褶后,塞入棉塞,置于適溫條件下培養(yǎng)。待看到培養(yǎng)基上產(chǎn)生與菌褶相應(yīng)大小的霧狀物時(shí),立即將附在試管壁上的菌褶片在無菌條件下取出。待長成肉眼可見的菌絲時(shí),挑取并放入新的試管培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。 
        亮發(fā)光桿菌孢子分離污染率較高,要剔除肉眼可見的各種雜菌。之后,挑取的各菌株一定要經(jīng)過出茹試驗(yàn)來鑒定是否是優(yōu)良的馴化菌株。

     Phospho-Cofilin (Ser3) 環(huán)化核苷酸調(diào)控陽離子通道蛋白亞型4

     Phospho-Cofilin/CFL1 (Tyr139) 環(huán)核苷酸陽離子通道蛋白α2抗體

     Phospho-Connexin 43 (Ser368) 還原型輔酶Ⅱ抗體

     phospho-Cortactin (Tyr466) 踝蛋白抗體

     phospho-CPI17 alpha (Thr38) 滑膜細(xì)胞凋亡抑制物1抗體

     phospho-c-Raf (Ser259) 琥珀酸脫氫酶復(fù)合體亞基A抗體

     phospho-c-Raf (Ser289) 呼吸道合胞病毒單克隆抗體

     phospho-c-Raf (Ser296) 后期促進(jìn)復(fù)合蛋白3抗體

     phospho-c-Raf (Ser338) 紅細(xì)胞生成素受體抗體
    亮發(fā)光桿菌

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