多數(shù)細胞系和原代細胞都會以一種單層的形式生長（單層細胞）或者覆蓋在玻璃或經(jīng)處理的塑料物體表面。為了保持細胞的健康與活躍增殖，通常需要對細胞進行有規(guī)律的傳代。

    zui常見的傳代方法是使用蛋白酶如胰酶或膠原酶破壞細胞間以及細胞與培養(yǎng)介質(zhì)間的連接。當細胞被解離成單細胞懸液時，再將它們稀釋并分發(fā)至新的培養(yǎng)容器中。在那里，細胞可以重新貼壁生長和分裂，然后經(jīng)過一段時間培養(yǎng)，細胞又再一次長滿（接近匯合）。此時，細胞又需要進行傳代或用于下游實驗。

    注意：以下指南描述了典型單層細胞的常規(guī)傳代與維持的基本原則。為了得到一致的結(jié)果，堅持良好的培養(yǎng)記錄非常重要，記錄應(yīng)包括細胞傳代的日期和傳代的次數(shù)。

    細胞的檢查：應(yīng)該養(yǎng)成良好的習(xí)慣對細胞進行常規(guī)的和認真的檢查，以了解它們的狀態(tài)和健康情況。

    首先，用肉眼檢查培養(yǎng)容器中是否存在可見的微生物污染，比如培養(yǎng)基pH改變、渾濁或有顆粒樣的物體。同時也要注意觀察有沒有小的真菌菌落，因為它們在顯微鏡下不易被發(fā)現(xiàn)。這些菌落可能會飄浮在液體表面，特別是在培養(yǎng)容器周邊附近。

    其次，在倒置顯微鏡下觀察細胞常規(guī)形態(tài)和生長狀態(tài)，留意檢查任何鏡下可見的微生物污染的跡象。在某些細胞系中，培養(yǎng)液中漂浮的細胞通常是死亡的細胞。但是，許多細胞在進行有絲分裂的時候也會變圓，形成折光性很強（很亮）的球體，并且在受到擾動后也會飄浮起來。兩者的區(qū)別在于，死細胞通常會變圓脫落但一般折光性不會很強。

    除了這些日常檢查外，還需要對細胞進行周期性的真菌、細菌以及支原體檢查。

    培養(yǎng)液的準備：準備針對特定細胞系在購買或文獻中推薦使用的新鮮培養(yǎng)液，并用記號筆在培養(yǎng)容器上標記傳代時間和細胞代數(shù)等信息。確保添加了補充成分（如：谷氨酰胺、生長因子、抗生素等）并且預(yù)先放置培養(yǎng)箱進行了pH平衡。一個75cm2的培養(yǎng)瓶大約需要12-15ml培養(yǎng)液，如何使用其他規(guī)格的培養(yǎng)容器需要進行相應(yīng)的調(diào)整。