PCR檢測試劑盒可用于豬全血、血清、淋巴結(jié)、脾臟、肌肉等樣本中的非洲豬瘟病毒核酸檢測。在非洲豬瘟病毒的高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針，在反應(yīng)體系中含有非洲豬瘟病毒基因組模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應(yīng)通道的信號強(qiáng)度進(jìn)行實時監(jiān)測和輸出，實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。
與此同時，該試劑盒技術(shù)無需常規(guī)核酸提取，僅需對樣品進(jìn)行簡單研磨、離心處理，即可開始后續(xù)核酸檢測。在保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的前提下，簡化了檢測步驟，將檢測時間縮短至不到1小時，成為適合于屠宰場、養(yǎng)殖場和流通環(huán)節(jié)非洲豬瘟檢測的技術(shù)。
PCR檢測試劑盒“變性-退火-延伸”三個步驟的實現(xiàn)方法是：
1、變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；
2、退火：退火也叫復(fù)性，模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，在這個溫度下，模板DNA單鏈能夠與引物的互補(bǔ)序列配對結(jié)合；所謂引物，是一段已經(jīng)確定好的DNA的片段，通過引物找到模板DNA的相應(yīng)位置，也就是確定了復(fù)制的起點；
3、延伸：DNA模板-引物結(jié)合物在72℃、DNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按照堿基互補(bǔ)配對原則和半保留復(fù)制原理，就能合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的復(fù)制鏈。
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