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    原代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)和注意事項(xiàng)說明

    點(diǎn)擊次數(shù):747次  更新時(shí)間:2022-07-19
       原代細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)要點(diǎn):
      1、本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
     
      2、所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
     
      3、蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
     
      4、如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
     
      5、如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
     
      原代細(xì)胞的注意事項(xiàng):
      1、收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。
     
      2、先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時(shí),穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),切忌在溫箱內(nèi)靜置過夜。
     
      3、靜置后鏡檢,拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
     
      4、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,收集細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基,留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代,瓶蓋可稍微擰松。
     
      5、細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗,可收集后4℃保存?zhèn)溆茫裳a(bǔ)加2%血清。剛開始傳代時(shí)建議一半用細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基,一半用客戶自備的培養(yǎng)基,使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件,以免因不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)狀態(tài)不佳。
     
      6、細(xì)胞胰酶消化液建議使用PBS配制,細(xì)胞運(yùn)輸和保存:
     
      可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存方式:干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇;收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。
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