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抗壞血酸氧化酶(AAO)生化檢測(cè)試劑盒

型 號(hào)

產(chǎn)品時(shí)間2024-11-22

所屬分類C代謝系列

報(bào)價(jià)300

產(chǎn)品描述:抗壞血酸氧化酶(AAO)生化檢測(cè)試劑盒AAO是定位于植物細(xì)胞壁的糖蛋白,屬“藍(lán)銅氧化酶"家族。細(xì)胞壁內(nèi)的抗壞血酸和AAO與細(xì)胞壁的代謝和生長(zhǎng)有著密切的聯(lián)系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通過(guò)質(zhì)膜上的細(xì)胞色素b還原,該過(guò)程中電子的跨膜運(yùn)輸能夠促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。

產(chǎn)品概述

商品屬性:

產(chǎn)品名稱:抗壞血酸氧化酶(AAO)生化檢測(cè)試劑盒

規(guī)格:100/96 50/48 

貨號(hào) : EY-01S141

測(cè)試方法:微量法 紫外分光光度法  

分類:C代謝系列

商品詳情:

測(cè)定意義:

AAO是定位于植物細(xì)胞壁的糖蛋白,屬藍(lán)銅氧化酶"家族。細(xì)胞壁內(nèi)的抗壞血酸和AAO與細(xì)胞壁的代謝和生長(zhǎng)有著密切的聯(lián)系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通過(guò)質(zhì)膜上的細(xì)胞色素b還原,該過(guò)程中電子的跨膜運(yùn)輸能夠促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。

測(cè)定原理:

AAO可直接氧化AsA,通過(guò)測(cè)定AsA的氧化量,可計(jì)算得AAO活力。

實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備:

低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液器、研缽、冰、蒸餾水。

5.png



ADH測(cè)定操作:

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。

3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽測(cè)定管=A1-A2。

測(cè)定步驟:

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、將試劑二在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。

3、操作表:

試劑名稱μL

測(cè)定孔

樣本

20

試劑二

760

試劑三

10

試劑四

10


將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,混勻后立即在340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2,計(jì)算ΔA=A1-A2。

注意:若A1-A2大于0.5,需將樣本用提取液稀釋,使A1-A2小于0.5,可提高檢測(cè)靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

NAD-MDH活力單位的計(jì)算:

1、血清(漿)NAD-MDH活力的計(jì)算

單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=6430×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NAD-MDH活力的計(jì)算:

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T =6430×ΔA÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總)÷T=3.215×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,8×10-4 L;ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),2000萬(wàn)。

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